乙肝治疗性疫苗的研究现状

　　一、治疗性疫苗的概念

　　二、乙型肝炎治疗性疫苗

　　(一)蛋白疫苗

　　蛋白疫苗是目前研究最为深入的治疗性疫苗，其主要原理是将乙型肝炎病毒(HBV)衣壳蛋白(如preS1，preS2，S)或核心抗原(HBcAg)进行一定的修饰后接种给患者。由于HBV衣壳蛋白和核心抗原均具有较强的抗原性，因此会诱发较强的特异性细胞免疫。目前研究较多的有亚单位疫苗、抗原抗体复合物疫苗和基于表位的疫苗。

　　Pol等采用preS2/S疫苗治疗慢性乙型肝炎，治疗6个月后，疫苗组和对照组血清HBV DNA阴转率分别为15%和2.7%。值得注意的是，治疗前血清HBV DNA大于200 mg/L的患者，疫苗组和对照组血清HBV DNA阴转率分别为16.7%和0%。在治疗第6～12个月之间，疫苗组血清HBV DNA下降幅度显著大于对照组。但是，在治疗12个月后，疫苗组和对照组血清HBV DNA阴转率、HBeAg/抗HBe转换率无统计学差异。

　　HBV核心抗原具有相当强的免疫原性和抗原性。在慢性HBV感染过程中，HBeAg是唯一能引发显著免疫反应的抗原，将核心蛋白与preS1的优势表位连接，能获得较为理想的疫苗。Chen等运用基因工程技术将preS1抗原蛋白的第3～55位氨基酸连接在截短的HBcAg羧基端，制成一种被称为“HBVCS1”的重组抗原，对小鼠进行免疫后测定其抗体滴度，发现小鼠体内产生了强烈的抗-HBc免疫应答和中等程度的抗preS1免疫应答，表明preS1的融合并不影响HBcAg的抗原性和免疫性，提示HBVCS1可能有作为乙型肝炎的治疗性疫苗的潜力。

　　Wen等将HBsAg和抗-HBs抗体连接起来，组成了抗原-抗体复合物，与单独使用HBsAg相比，抗原-抗体复合物显著增加了免疫的效率。其机制可能是由于抗原-抗体复合物中的Fc段与抗原提呈细胞膜表面受体结合，加速其对抗原的加工和提呈，同时促进Thl型细胞因子IFN-γ 的分泌，进而诱发更为强烈的细胞免疫应答。他们用抗原-抗体复合物治疗了l4例慢性乙型肝炎患者，治疗6个月后，血清HBV DNA和HBeA转阴率分别为64.3%和42.9%。Wen等进一步用乙型肝炎表面抗原-抗体免疫复合物(yeast-derived hepatitis B surface antigen-antibody immunogenic complex，YIC)制成疫苗进行临床试验，第一阶段有22名志愿者分3组分别注射YIC 30μg、60μg、90μg，第二阶段有9名志愿者分6次注射YIC 90μg，结果，所有受试者对YIC均可耐受，肝功能和肾功能检测均未发现异常，同时产生了最高达1000 mIU/L的抗-HBs并伴有血清IFN-γ和IL-2水平升高，而血清IL-4、IL-6、IL-l0和TNF-α没有显著升高。提示YIC不仅有很强诱导产生抗-HBs的能力，而且有很好的安全性。最近的Ⅱ期临床试验比较了YIC 30μg、60μg和铝佐剂，每4周一次，疗程24周治疗慢性乙型肝炎的初步疗效。结果，疗程结束时，YIC30μg组、60μg组和铝佐剂组HBeAg血清转换率相近，没有统计学差异;但疗程结束后随访24周末，YIC60μg组和铝佐剂组HBeAg血清转换率分别为21.8% (17/78) 和9% (7/78)，95%可信限1.5%～24.1%，有统计学差异。YIC30μg组、60μg组和铝佐剂组不良事件的发生率相近，分别为5.1%、3.6%和5.0%。

　　基于抗原并非直接刺激淋巴细胞，而是经由抗原提呈细胞加工成为抗原表位后呈递给淋巴细胞，进而激活淋巴细胞的原理，Heathcote等制成一种脂蛋白疫苗。脂蛋白疫苗的组成包括HBcAg的优势CTL表位18～27位氨基酸肽链和能被CD4 Th细胞识别的破伤风类毒素830～843位氨基酸肽链以及2个棕榈酸分子。动物实验证明，脂蛋白疫苗能有效地诱发特异性抗-HBc细胞毒应答。有19例慢性乙型肝炎患者接受脂蛋白疫苗治疗并未观察到有毒副作用，但其产生的细胞毒反应只有实验动物的1/10，而且对血清HBV DNA阴转率、HBeAg/抗HBe转换比率没有显著影响。

　　(二)基因疫苗

　　研究指出，某些细胞因子如IL-2、IL-12、IFN-γ能使慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平降低。在DNA疫苗中引入细胞因子佐剂，可增强免疫反应并改变T细胞应答的方向，引导其向Th1的方向发展。Yang等设计了一种包含大部分HBV抗原(HBsAg， preS1/S2，HBeAg，HBcAg)及IL-12基因的DNA疫苗，与拉米夫定联合治疗了12例慢性乙型肝炎患者，酶联免疫印迹显示，它能诱导机体产生特异性的分泌IFN-γ的T细胞反应，并使50%患者血清HBV DNA降低至不可检测水平，而且不伴有血清丙氨酸转移酶的升高。

　　Mancini等用编码preS2/S蛋白的重组质粒接种10例慢性乙型肝炎患者，结果，有2例患者的外周血单个核细胞发生了抗原特异性的T淋巴细胞增殖反应，并且抗-HBV特异性的分泌IFN-γ的T细胞数目大幅度提高;有5例患者血清HBV DNA水平出现了暂时性下降。他们随后设计了临床I期试验来评价表达HBsAg和preS2/S的DNA疫苗的安全性、耐受性和免疫原性，10例HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者接受了DNA疫苗治疗。结果，经3次疫苗注射后，所有患者耐受性良好，全部患者产生了抗-HBs特异性T细胞，50%的患者产生了抗-preS2特异性T细胞。

　　(三)细胞疫苗

　　荷载HBV相关抗原的DC可能有效打破免疫耐受，恢复细胞免疫应答和清除HBV。Akbar等将小鼠脾脏DC在体外扩增后荷载HBsAg，制备DC疫苗;用该疫苗治疗HBV转基因小鼠，结果发现，注射2次DC疫苗就能清除HBV转基因小鼠循环HBsAg，并产生抗-HBs。

　　Miller等采用鸭胚胎成纤维细胞(primary duck embryonic fibroblasts，PDEF)，经鸭乙型肝炎病毒核心抗原(DHBcAg)的DNA质粒转染，制备了一种全细胞疫苗，可持续表达DHBcAg。研究指出，PDEF –DHBcAg全细胞疫苗对DHBV的感染没有预防作用，但对DHBV感染后的持续化有预防作用;说明接种PDEF –DHBcAg全细胞疫苗能激发有效的免疫应答并导致DHBV感染的快速清除。

（实习编辑：李杏）